Otra de las operaciones que realizarás en el laboratorio es la cuantificación de una sustancia en solución. Para hacerlo tendrás que utilizar el espectrofotómetro, el equipo que permite conocer la cantidad de energía que absorbe la solución cuando la atraviesa un haz de luz monocromática.
El espectrofotómetro está formado por:
- Una fuente de radiación. Para radiaciones en el espectro ultravioleta (entre 195 y 400 nm.) se utiliza una lámpara de deuterio y para radiaciones el rango de luz visible (entre 400 y 780 nm.) una lámpara de tungsteno.
- Un sistema para obtener radiación de una determinada longitud de onda.
- Un compartimento donde se coloca la muestra. Se utilizan cubetas de un centímetro para contener la muestra. Las cubetas son de plástico para mediciones en el rango visible y de cuarzo para el ultravioleta.
- Un detector de luz y amplificador de la señal.
- Un sistema de lectura y análisis de datos.
Todas las sustancias absorben energía al interaccionar con radiaciones electromagnéticas. La energía absorbida se denomina absorbancia y se representa por la letra A. Cada sustancia presenta un espectro de absorción en el que se recoge la variación de absorbancia en función de la longitud de onda. Este espectro es una huella de cada sustancia y varía en función de la estructura y del medio en el que se encuentra.
El espectrofotómetro permite seleccionar una longitud de onda determinada y conocer la absorbancia de una sustancia al compararla con una solución “blanco”. Conociendo A podemos calcular la concentración a partir de la ley de Beer-Lambert,.
Luz formada por un solo color, es decir con una única longitud de onda.
Isótopo estable del hidrógeno con un neutrón en su núcleo (el hidrógeno no tiene neutrones).
Parámetro para definir una onda. Es la distancia física a partir de la cual la onda se repite. Se representa por la letra griega lambda y se mide en nanómetros (nm).
La luz visible está compuesta por radiaciones de longitudes de onda comprendidas entre 400 y 700 nm ( 4·10-7 y 7·10-7 m). La sensibilidad del ojo humano depende de la longitud de onda y tiene un máximo en 550 nm. Algunas personas son capaces de percibir desde 380 hasta 780 nm.
Es una representación de la fracción de radiación que absorbe una partícula o molécula, dentro de un rango de frecuencias. Ese rango de frecuencias es el espectro contínuo de luz, que se representa como una banda con diferentes fracciones de color (desde el morado al rojo). Cuando la luz incide sobre un átomo o molécula, ésta es absorbida, provocando cambios en su estructura y generando un espectro característico de ese átomo o molécula. Es decir, en esa banda multicolor, aparecen líneas negras en una posición determinada (se ha absorbido luz en una longitud de onda concreta). En clínica resulta útil conocer la longitud de onda a la que absorbe una molécula, para poder hacer determinaciones bioquímicas, como la glucosa, colesterol, etc…
Magnitud que expresa la cantidad de una sustancia por unidad de volumen