2.2.4. Tipos de contadores hematológicos.

Existen diversos tipos de contadores en función de su distinta capacidad para realizar recuento diferencial de leucocitos.

  • Contadores de una población.

Suelen tener un dispositivo de medida basado en la variación de la resistencia eléctrica. Tienen dos canales, en uno se cuentan hematíes y plaquetas y en otro leucocitos. No realizan el recuento diferencial de estos últimos.

  • Contadores de tres poblaciones.

Distinguen tres poblaciones leucocitarias, pequeñas, medianas y grandes. Tienen dos canales, uno para plaquetas y eritrocitos y otro para leucocitos. El sistema de medida suele ser de variación de la resistencia eléctrica. Miden el tamaño de los leucocitos y elaboran unas curvas de distribución diferenciando tres subpoblaciones leucocitarias.

  • Pequeñas: Linfocitos.
  • Medianas: Monocitos, eosinófilos, basófilos y linfocitos grandes.
  • Grandes: Neutrófilos.
  • Contadores de cinco poblaciones.

Realizan el recuento diferencial de leucocitos completo. Para ello, la mayoría de los modelos combina la información que aporta la difracción de la luz láser con la aplicación de otros principios físicos y/o químicos tales como la medida de la resistencia eléctrica, la aplicación de ondas de radiofrecuencia midiendo la variaciones de intensidad de las mismas o el empleo de tinciones citoquímicas.

Una de las tecnologías más implantadas en nuestro entorno es la basada en las reacciones citoquímicas de los leucocitos y en el análisis del volumen y complejidad celular de los mismos (Technicon, Advia). Utilizan la tinción citoquímica de la peroxidasa alcalina. La corriente sanguínea se divide en cuatro canales:

  • Canal hemoglobina. Se produce la reacción de cianmetahemoglobina y un fotómetro mide la intensidad del color formado.
  • Canal eritrocitos y plaquetas. Utiliza una suspensión muy diluida y utiliza un sistema óptico que recoge la luz dispersada por las células utilizando sensores específicos para plaquetas y hematíes.
  • Canal peroxidasa. En este canal se realiza el recuento diferencial de los leucocitos. Para ello se determina la actividad de la peroxidasa alcalina, enzima que poseen en cantidad variable los distintos glóbulos blancos, y el tamaño de cada leucocito analizado. Este canal no permite diferenciar a los basófilos.
  • Canal de basófilos. En este canal se usa un detergente que elimina el citoplasma de todas las células excepto los basófilos. Tras el análisis de la dispersión de la luz láser y basándose en el tamaño y en el número de lóbulos que presentan los núcleos se identifican a los mismos. Esta última característica la puedes encontrar denominada como índice de lobularidad.
Imagen de un contador de cinco poblaciones.
  • Citómetros de flujo.

El citómetro es un aparato capaz de medir varios parámetros celulares a partir de una suspensión celular, que circula en forma de flujo continuo, por medio de la interacción de las células con un haz de luz láser. El citómetro incorpora, como elemento diferenciador de los contadores hematológicos, la capacidad de medir emisiones de luz fluorescente por parte de las células analizadas.

Estos aparatos, en la práctica, son contadores hematológicos que utilizan la dispersión de la luz láser como método de identificación celular al que se le han añadido una serie de detectores y filtros que permiten medir la intensidad de distintos tipos de luz fluorescente. El citómetro obtiene información de la luz dispersada y también de las emisiones de luz fluorescente captadas mediante un sistema de filtros y fotodetectores específicos dependiendo del color de la emisión fluorescente.

Es una enzima que cataliza la oxidación de un amplio número de sustratos orgánicos e inorgánicos, utilizando el poder oxidante del peróxido de hidrógeno.

Instrumento usado para medir la intensidad de luz.

Para saber más

Coulter fue el pionero con respecto a los contadores de partículas y los intrumentos de medición. Gracias a los pulsos, se puede digitalizar y guardar diferentes parámetros en cada pulso. Los contadores hematológicos modernos y los citómetros de flujo basan su trabajo en conseguir que las células en suspensión pasen a través de un capilar alineadas individualmente de una en una. Esto se consigue gracias a la aplicación de un principio denominado enfoque hidrodinámico. En el siguiente enlace se muestra un poco de historia sobre este tema.

Historia de analizadores

En la siguiente tabla se muestran las similitudes y diferencias entre ambos aparatos.

Características de los contadores hematológicos y los citómetros de flujo
Característica Contador hematológico Citómetro de flujo
Tipos de muestra Sangre. Diversas (sangre, médula ósea, tejidos, etc.).
Principios en los que se basa la identificación y caracterización de las células Enfoque hidrodinámico. Enfoque hidrodinámico.
Incidencia de luz láser. Incidencia de luz láser.

Se combina con:

  • Medida de la resistencia eléctrica.
  • Medida ondas radiofrecuencia.
  • Reacciones citoquímicas.

Se combina con:

Utilización de anticuerpos monoclonales marcados con fluorocromos (sustancias que emiten luz fluorescente cuando son excitadas con una fuente de energía adecuada).

Poblaciones celulares que permite diferenciar Su capacidad de identificación está restringida a los elementos formes presentes en sangre periférica. Muy variada. En teoría, podemos identificar cualquier tipo de célula o características de la misma para la que dispongamos de un anticuerpo monoclonal específico.

Las técnicas de citometría aportan gran información en las analíticas de rutina, consiguiendo una mejora en la calidad de los aparatos y la reducción de los costes gracias a estas tecnologías, donde se están consiguiendo la convergencia de estos dos tipos de aparatos. Los modernos contadores hematológicos están incorporando características similares a las de un citómetro de flujo, es decir, son capaces de medir distintas clases de luz fluorescente para poder diferenciar poblaciones celulares que hasta hace muy poco tiempo era necesario cuantificar por otros métodos.

Para saber más

No dejes de visitar la siguiente página web sobre la citometría de flujo, su calidad y estilo didáctico la convierten en un espacio de referencia para iniciarse en esta materia.

Citometría de flujo.