3.3.3.3. Determinación de la hemoglobina.

La determinación de la tasa de hemoglobina en sangre, completa los parámetros básicos para caracterizar la serie roja y resulta totalmente imprescindible en el diagnóstico de las anemias y las poliglobulias. El método internacional de referencia es el método colorimétrico de la cianmetahemoglobina. Existen otros métodos que, en ocasiones, pueden usarse de manera alternativa tales como los hemoglobinómetros de Shali, método colorimétrico de la oxihemoglobina, etc.

El método se fundamenta en transformar toda la hemoglobina que hay en la muestra en un derivado de esta, la cianmetahemoglobina que posee un color muy estable y característico. A continuación, se mide la intensidad de color de esta solución determinando su absorbancia mediante un espectrofotómetro.

La absorbancia de la solución es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra y se puede determinarla comparando la absorbancia de la solución de cianmetahemoglobina obtenida a partir de la muestra frente a la absorbancia de un patrón de concentración conocida.

Se muestra la pantalla de un espectrofotómetro con valores de absorbancia.

Otras características destacables de esta determinación son:

  • El reactivo utilizado para transformar la hemoglobina en cianmetahemoglobina se denomina reactivo de Drabkin. Realmente, el utilizado hoy día, es un compuesto mucho más concentrado que el reactivo de Drabkin original.
  • El reactivo hemoliza los hematíes y dos de sus componentes, el cianuro y el ferricianuro transforman la hemoglobina en cianmetahemoglobina.
  • El color se mantiene estable durante varias horas.
  • Se suelen utilizar soluciones patrón de hemoglobina de concentración 15 g/dl de hemoglobina.
  • También se puede usar soluciones patrón de cianmetahemoglobina cuya absorbancia se corresponde a una concentración de hemoglobina conocida.
  • La longitud de onda a la que se mide es 540 nm.

Reactivo para hemoglobina.

Derivado de la hemoglobina de color estable utilizado para la determinación de la concentración de hemoglobina de una muestra de sangre. Es el producto final del método de determinación del mismo nombre.

La intensidad de luz que absorbe una muestra cuando incide sobre ella un haz de rayos.

Aparato usado en el laboratorio capaz de medir la intensidad de luz que absorbe una muestra.

Romper los glóbulos rojos de la sangre, con liberación de su contenido.

Ejercicio resuelto

Cálculo de la tasa de hemoglobina de una muestra de sangre.

Calcula la tasa de hemoglobina de una muestra por el método de la cianmetahemoglobina, sabiendo que tras realizar el procedimiento, se obtienen los siguientes valores de absorbancia.

  • Absorbancia del patrón de hemoglobina de concentración 15 g/dl = 0,420.
  • Absorbancia de la muestra de sangre problema = 0,395.
  • Causas de error más frecuentes en la determinación de la hemoglobina.

Esta técnica es muy fiable y la mayoría de los errores se van a producir como consecuencia de defectos en la manipulación, como por ejemplo, las pipetas mal calibradas, material sucio, errores en la calibración del espectrofotómetro o en la selección de la longitud de onda adecuada.

Debes conocer

En la siguiente presentación se puede observar las principales pasos para la determinación manual de la hemoglobina.