2.7.- Tinción de Ziehl-Neelsen (AAR).

¿Qué sabes acerca de la tuberculosis?

Es una enfermedad infecciosa causada por una micobacteria, el bacilo de Koch, cuyo nombre científico es Mycobacterium tuberculosis. Esta infección afecta particularmente a los pulmones pero también a otros órganos.

La tuberculosis representa uno de los principales problemas de salud pública a nivel mundial y la tinción de Ziehl-Neelsen es una de las principales herramientas para su diagnostico.

Como ya estudiaste antes, la pared celular de las micobacterias contiene una gruesa capa de ceras que las hace resistentes a las condiciones ambientales adversas, a los desinfectantes y también dificulta su tinción. Sin embargo una vez teñidas las micobacterias son capaces de resistir la decoloración por ácidos y alcoholes.

La imagen muestra dos tipos de bacterias unas de color fucsia con forma de bacilos y que se mantienen agrupadas entre ellas formando cordones y otras , en mucha mayor cantidad azules y con forma de coco.

Para realizar la tinción de Ziehl-Neelsen necesitas:

  • Un colorante primario: Fucsina fenicada. Es una mezcla de fucsina y fenol capaz de teñir las células cuando se aplica calor. El fenol favorece la penetración de la fucsina en la pared celular.
  • Un agente decolorante: Solución de alcohol-ácido clorhídrico.
  • Un contracolorante: Azul de metileno.

Pasos del procedimiento:

  1. Cubre la preparación con fucsina fenicada y aplica calor durante 5 min. Observa la emisión de vapores durante el procedimiento. Evita que el colorante hierva y se seque. Añade más si es necesario.
  2. Lava la preparación con abundante agua.
  3. Aplica una solución de alcohol: ácido clorhídrico durante 30 segundos sobre la preparación.
  4. Lava con abundante agua.
  5. Aplica azul de metileno sobre la preparación durante 1 minuto.
  6. Lava con abundante agua.
  7. Seca la preparación y enfócala al microscopio con el objetivo de100x.

Resultados esperados:

Las bacterias ácido-alcohol resistentes retienen la fucsina y se observarán teñidas de fucsia (rosa oscuro). El resto de las bacterias se decolorarán con la mezcla alcohol-ácido y se teñirán al aplicar el colorante de contraste, por lo que aparecerán teñidas en azul.

En la imagen anterior puedes observar el resultado de una tinción de Ziehl-Neelsen realizada en un frotis en el que había una mezcla de dos bacterias: Mycobacterium phlei y Staphylococcus aureus.

Autoevaluación

Pregunta

Indica cuál es el agente decolorante utilizado en la tinción de gram.

Respuestas

Alcohol: ácido clorhídrico.

Alcohol: acetona.

Alcohol: agua.

Acetona: lugol.

Retroalimentación