3.- Técnicas de siembra, inoculación y aislamiento.

Caso práctico

Retrato de Susana. Esta semana es Carlos el encargado de realizar las siembras de las muestras, y Susana (que todavía sigue dándole vueltas a por qué le salieron mal) le pregunta si le importa que esté delante cuando siembre. Será una manera de repasar los procedimientos y podrá comprobar si hace algo diferente al sembrar que pueda influir en que no crezca nada en sus placas. Carlos prefiere trabajar junto a Susana y le llama para que le acompañe cuando ha terminado de rotular las placas en las que va sembrar cada una de las muestras.

Entre los dos repasan la lista de trabajo y comprueban por última vez el protocolo que indica los pasos del procedimiento.

Una vez que todo el material está preparado, Carlos comienza la siembra realizando en primer lugar los subcultivos e inoculaciones para las pruebas de identificación.

A continuación, realizará la siembra de las muestras recibidas ese día en las placas y finalmente las siembras para las pruebas de sensibilidad solicitadas. Es importante seguir siempre la misma rutina de trabajo para reducir las posibilidades de confusión.

Susana observa con detenimiento y trata de permanecer lo más callada posible durante la siembra para no distraer a Carlos, un error en este momento invalidaría todo el trabajo realizado, y también para no contaminar las placas. Una de las principales reglas a seguir relacionadas con el procedimiento de siembra es tratar de no introducir en los cultivos, bacterias procedentes del ambiente o de la flora normal de la persona que siembra, que pudieran dificultar el diagnóstico. Algunas de las muestras deberán ser manipuladas en la cabina de seguridad, por lo que Susana la pone ya en marcha para poder usarla en cuanto se necesite.

En microbiología, nuevo cultivo microbiológico hecho mediante la transferencia de una colonia de un cultivo anterior a otro medio de crecimiento. Esta acción se denomina subcultivo. El subcultivo se utiliza para prolongar la vida, obtener un cultivo puro o expandir el número de células.

¿Para qué sembramos?

La inoculación de medios de cultivo con las muestras enviadas al laboratorio es un paso imprescindible para aislar el microorganismo patógeno presente en ellas y poder identificarlo. En determinadas ocasiones este aislamiento no resulta fácil:

  • A veces la bacteria no se encuentra en la muestra en cantidad suficiente para poder trabajar con ella. Las técnicas de inoculación nos van a permitir aumentar la cantidad de ese microorganismo para poder realizar con él pruebas de identificación.
  • Otras veces las muestras contienen varios tipos de microorganismos, parte de los cuales son contaminantes. Es importante separar los microorganismos presentes en la muestra y seleccionar los que posiblemente hayan producido la infección, estableciendo cultivos puros o axénicos, es decir cultivos que contengan solo un tipo de microorganismo. Para realizar esta tarea se emplean las técnicas de agotamiento.

En la imagen siguiente puedes ver como se realiza una siembra en placa utilizando un asa. Fíjate como se sitúa cerca de la llama del mechero.

En la imagen se puede ver una placa de agar abierta cerca de un mechero en la que se esta realizando la siembra en su superficie utilizando un asa .

A partir de ahora llamaremos:

  • Inóculo: A la porción de la muestra transferida a los medios de cultivo.
  • Cultivos primarios: A los obtenidos a partir de las muestras biológicas.
  • Subcultivos: A los cultivos obtenidos a partir de las colonias seleccionadas en el cultivo primario.