5.2.- Determinación del crecimiento en medios líquidos.

Caso práctico

Carlos y Susana comentando el enrase de un tubo.

Carlos y Susana examinan los cultivos sembrados 24 horas antes. En general la mayor parte de las bacterias patógenas, cuando crecen en medios enriquecidos como el agar sangre o medios líquidos como el TSB y BHI muestran crecimiento a las 24 horas de su siembra.

Sin embargo si hemos utilizado medios selectivos el protocolo señala que deberemos esperar un mínimo de 48 horas antes de examinar las placas. A las bacterias les cuesta más adaptarse a estos medios (son muy diferentes del medio en el que se encontraban) y el crecimiento tarda más en producirse.

Cada género bacteriano tiene establecidas unas condiciones óptimas de crecimiento que además de temperatura y oxígeno incluyen también un tiempo de incubación. Hay géneros bacterianos caracterizados por un crecimiento más lento, son bacterias exigentes que utilizan medios de cultivo especiales. Legionella, Brucella o Bordetella pueden tardar hasta 5 días en crecer.

¿Cuáles son los criterios para decidir que hay crecimiento en un medio líquido?

Fíjate bien en la imagen siguiente, se observa una gradilla con 6 cultivos líquidos bacterianos. En algunos se observa turbidez por todo el tubo, en otros hay crecimiento sólo en la parte superior o inferior del tubo, etc. Todos estos signos indican que ha habido crecimiento bacteriano.

Para decidir si hay crecimiento en el tubo que estás observando deberás considerar estos 4 aspectos:

Presencia de Turbidez: Mira si el caldo aparece más o menos turbio. Para poder determinar la turbidez suele ser útil compararla con un tubo del mismo caldo sin inocular que hayamos incubado en las mismas condiciones.

Presencia de Película: Comprueba si hay una capa a modo de membrana en la parte superior del caldo. Puede tener un grosor variable y cubrir toda la superficie del caldo expuesta al aire, formar un anillo o formar flóculos.

Presencia de sedimento: Sin agitar el tubo, mira si hay un depósito de células en el fondo del mismo. Si es así, agita ligeramente el tubo golpeándolo con el dedo para ver si se vuelven a poner todas en suspensión.

Presencia de limo: Se denomina así al sedimento que no se separa al agitar el tubo y asciende desde el fondo en conjunto.

Presencia de burbujas: Comprueba si se han formado en el interior del caldo burbujas, si es así es una prueba de que en ese caldo hay bacterias que están realizando su metabolismo.

El patrón de crecimiento de las bacterias en los caldos nos da pistas acerca de la afinidad de éstas por el oxigeno.

  • Las bacterias aerobias estrictas sólo crecerán en la parte superior del caldo, donde más oxígeno hay. Forman una película superficial.
  • Las bacterias anaerobias facultativas, crecerán uniformemente a lo largo de todo el tubo, provocando la turbidez del caldo.
  • Las bacterias anaerobias, en caso de que crezcan (aerotolerantes), formarán un sedimento en el fondo del tubo. Porque es en esta zona donde la cantidad de oxígeno es menor.

Falta de transparencia de un líquido debido a la presencia de partículas en suspensión. Cuantos más sólidos en suspensión haya en el líquido (generalmente se hace referencia al agua), más alta será la turbidez. Se mide en Unidades Nefelométricas de turbidez, o Nephelometric Turbidity Unit (NTU). El instrumento usado para su medida es el nefelómetro o turbidímetro, que mide la intensidad de la luz dispersada a 90 grados cuando un rayo de luz pasa a través de una muestra de líquido.

Agregado sólido en suspensión.