6.- Técnicas de recuento de microorganismos.

Caso práctico

Susana observando y Carlos comenta una imagen al microscopio. Hoy es el último día que Carlos y Susana están con Coro, y esta les prepara como despedida una tarea que les permita utilizar todas las destrezas conseguidas durante estos días.

Les entrega unas muestras de orina de varias pacientes con diagnóstico presuntivo de infección urinaria y les pide que hagan cuántas pruebas crean necesarias para determinar la existencia o no de infección.

Los dos aceptan el reto con agrado y realizan juntos la tinción de gram de las muestras de orina sin centrifugar para confirmar la presencia de bacterias en ellas.

Susana mira al microscopio la primera muestra y comprueba que efectivamente se observan bacilos gram negativos por lo que es posible que se trate de un caso de infección.

­­-¿Recuerdas cómo se realizan los recuentos? -pregunta Susana a Carlos.

-Creo que sí -responde Carlos y explica a Susana los pasos a dar para realizar un recuento bacteriano.

¿Crees que se podría utilizar el microscopio para contar bacterias?

En realidad sí. El recuento directo bajo el microscopio, utilizando una cámara de recuento, es un método que podría aplicarse para contar las bacterias presentes en una muestra biológica, sin embargo debido a su pequeño tamaño no es un método que se utilice demasiado.

Existen otros tipos de recuentos como los electrónicos, en contadores tipo Coulter o mediante citometría de flujo que nos dan la misma información. Ninguno de estos dos métodos es muy utilizado en los laboratorios de microbiología clínica. Son métodos que no distinguen si las bacterias están vivas o muertas y en el caso de los contadores electrónicos no diferencian las bacterias de las impurezas que pudiera contener la muestra. Estos métodos se suelen utilizar para cribado.

Existe una manera indirecta de saber si en nuestras muestras o cultivos existe un gran número de bacterias o no.

  • Determinando la turbidez del medio de cultivo.
  • Midiendo la actividad metabólica, consumo o producción de metabolitos oxígeno, CO2, etc de alguna sustancia

Los métodos más empleados en microbiología utilizan la técnica del recuento de viables en placa. Recuentos semicuantitativos que determinan UFC (Unidades formadoras de colonias).

Los métodos de recuento en placa se basan en los siguientes principios:

  1. Si utilizamos un medio idóneo para el cultivo cada una de las bacterias vivas de la muestra dará lugar a una colonia.
  2. Cada una de las colonias formadas recibe el nombre de UFC (Unidad Formadora de colonias).
  3. El recuento de las UFC crecidas en la placa a partir del inóculo realizado permite dar un valor aproximado del número de bacterias presentes en la muestra.

Las cámaras de recuento se utilizan para determinar el número de partículas por unidad de volumen de un líquido. Leucocitos, eritrocitos, trombocitos, bacterias, esporas, polen etc. se cuentan visualmente con un microscopio.

Aparato utilizado para contar y medir el tamaño de partículas en solución. Se utiliza principalmente para contar células sanguíneas en su aplicación como contador hematológico, pero también se puede utilizar para contar bacterias, células procariotas y partículas virales. El término principio Coulter hace referencia al uso de un campo eléctrico para contar y dimensionar partículas que se encuentran en suspensión en un líquido conductor.

Tecnología basada en la utilización de luz láser, empleada en el recuento y clasificación de células según sus características morfológicas.

Para saber más.

En este link podrán encontrar un ejemplo de aplicación de las cámaras de recuento usadas en el laboratorio clínico.

Las cámaras de recuento.