4.1.- Preparación de tampones y reactivos (I).
Todos los reactivos de biología molecular se preparan con agua bidestilada. Para la realización de algunas técnicas se compran ampollas comerciales libre de ADNasas y ARNasas, enzimas que pueden degradar el ADN y el ARN respectivamente.
- Las técnicas de biología molecular emplean volúmenes pequeños, microlitros: En la tabla se indican las equivalencias de las unidades utilizadas en biología molecular.
Ejemplos:
Un mililitro (ml) es 10-3 litros. Es lo mismo que decir que hay 1000 ml en 1 litro (l).
Un microlitro (µl) es 10-3 ml, o lo que es lo mismo hay 1000 µl en 1 ml.
Un microlitro (µl) es 10-6 litros o lo que es lo mismo, hay 1.000.000 µl en 1 litro.
- Lo mismo ocurre con las concentraciones. En biología molecular se utilizan concentraciones expresadas en términos de milimolaridad (milimoles/litro) o micromolaridad (micromoles/litro).
Una concentración 1 mM = 1 mmol/l = 10-3 M.
Una concentración 1 µM = 1 µmol/l = 10-6 M.
Una concentración 1 nM = 1 nmol/l = 10-9 M.
- Cuando se prepara un reactivo generalmente se hace a partir de una solución madre o solución stock. Esta es una solución mucho más concentrada que la solución que luego se utiliza al hacer la técnica (solución de trabajo) Por definición a la concentración de trabajo de un reactivo de un reactivo se le denomina "1x". Así por ejemplo, un tampón 10x (independientemente de sus ingredientes o molaridad) tiene una concentración 10 veces superior a la concentración de trabajo.
Cualquier solución que se prepare a una concentración más elevada que la requerida en el análisis.
Ejercicio resuelto
¿Cómo prepararías 1 litro de una solución de trabajo a partir de un stock 50x?