4.1.- Preparación de tampones y reactivos (I).

Como ya ha comentado Maite, en biología molecular es necesario preparar reactivos a unas concentraciones algo diferentes de las usadas en el laboratorio general. En este apartado se repasarán algunos de los puntos a tener en cuenta a la hora de prepararlos.

En la imagen se observan varios destiladores para tratar el agua que se utiliza en los análisis de biología molecular.

Todos los reactivos de biología molecular se preparan con agua bidestilada. Para la realización de algunas técnicas se compran ampollas comerciales libre de ADNasas y ARNasas, enzimas que pueden degradar el ADN y el ARN respectivamente.

  • Las técnicas de biología molecular emplean volúmenes pequeños, microlitros: En la tabla se indican las equivalencias de las unidades utilizadas en biología molecular.
    En la imagen se observa una tabla en la que se muestran las abreviaturas de las unidades de volumen y concentración utilizados en un laboratorio de biología molecular, los prefijos micro, nano, pico y su significado.

    Ejemplos:

    Un mililitro (ml) es 10-3 litros. Es lo mismo que decir que hay 1000 ml en 1 litro (l).

    Un microlitro (µl) es 10-3 ml, o lo que es lo mismo hay 1000 µl en 1 ml.

    Un microlitro (µl) es 10-6 litros o lo que es lo mismo, hay 1.000.000 µl en 1 litro.

  • Lo mismo ocurre con las concentraciones. En biología molecular se utilizan concentraciones expresadas en términos de milimolaridad (milimoles/litro) o micromolaridad (micromoles/litro).

    Una concentración 1 mM = 1 mmol/l = 10-3 M.

    Una concentración 1 µM = 1 µmol/l = 10-6 M.

    Una concentración 1 nM = 1 nmol/l = 10-9 M.

  • Cuando se prepara un reactivo generalmente se hace a partir de una solución madre o solución stock. Esta es una solución mucho más concentrada que la solución que luego se utiliza al hacer la técnica (solución de trabajo) Por definición a la concentración de trabajo de un reactivo de un reactivo se le denomina "1x". Así por ejemplo, un tampón 10x (independientemente de sus ingredientes o molaridad) tiene una concentración 10 veces superior a la concentración de trabajo.

Cualquier solución que se prepare a una concentración más elevada que la requerida en el análisis.

Ejercicio resuelto


¿Cómo prepararías 1 litro de una solución de trabajo a partir de un stock 50x?