Como has visto anteriormente todos los medios de cultivo llevan como suplemento soluciones de antibióticos y antifúngicos que tratan de evitar el crecimiento de microorganismos en ellos. Estos compuestos deben ser añadidos al medio a una concentración baja, para no entorpecer el crecimiento celular, por lo que el riesgo de contaminación de los cultivos suele ser alto. El empleo de la técnica aséptica es fundamental para poder mantener la esterilidad y viabilidad del cultivo.
¿Qué microorganismos nos podemos encontrar contaminando nuestros cultivos?
Fundamentalmente tres tipos: Bacterias hongos y virus.
- Bacterias que formen parte de la flora de la piel del operador o de su nariz o garganta: Estafilococos, estreptococos, E. coli, micoplasmas, pueden contaminar nuestros cultivos si hay algún fallo en el procedimiento de técnica aséptica.
- Hongos: Algunos tipos de levaduras que pueden estar en nuestra piel (Candida) y los hongos presentes en el aire o en el agua de los reactivos pueden causar contaminación de nuestros cultivos.
- Virus: Los virus son parásitos intracelulares que pueden estar ya presentes en la muestra cuando llega al laboratorio.
¿Qué signos nos indican que un cultivo puede estar infectado?
- Cambio de color del medio: como ya hemos indicado anteriormente, el viraje del color del medio a amarillo y la aparición de turbidez son signos de una posible contaminación bacteriana.
- Observación de bacterias, hifas de mohos y levaduras en el cultivo.
- Alteraciones en el crecimiento de las células.
- Cambios en la morfología celular.
- Alteración de la viabilidad celular.
Las imágenes corresponden a cultivos celulares de dos semanas de duración en los que las células muestran poco desarrollo. Se pueden observar estructuras sin identificar entre las células del cultivo y algunas de las células presentan unas formas esféricas adheridas a su superficie. La morfología celular también ha cambiado. Las estructuras de forma esférica se tiñen de azul con el colorante empleado (Giemsa). Presumiblemente estos cultivos están infectados por hongos.
De todos los tipos de contaminación, la causada por virus y micoplasmas es la que es más difícil de detectar. Muchas veces no existe turbidez en el medio y su color tampoco varía. Las células suelen parecer enfermas y pueden verse en el cultivo morfologías diferentes a las habituales.
Los micoplasmas son un tipo de bacterias de tamaño muy pequeño (0,2 µm) que pueden atravesar los filtros utilizados para la esterilización de las soluciones que forman parte de los medios de cultivo. Representan un auténtico problema en el cultivo celular puesto que al no tener pared celular son resistentes a los antibióticos utilizados en el cultivo. Se estima que el 35% de los cultivos celulares que se hacen están contaminados con micoplasma. Es conveniente comprobar periódicamente si nuestro cultivo se ha contaminado con esta bacteria. Para ello se suele utilizar la aplicación de un colorante fluorescente Hoechst que tiñe el ADN y permite su visualización. En el ensayo se utiliza un control positivo de células infectadas con este microorganismo.
Son un tipo de bacterias Grampositivas, que cuentan en su estructura con ácidos teicoicos y lipoteicoico. con forma de coco y agrupadas en racimos.
Son un tipo de bacterias Grampositivas, que cuentan en su estructura con ácidos teicoicos y lipoteicoico. con forma de coco y agrupadas en cadenas.
Son bacterias cuyo tamaño oscila entre 125 a 300 nm, son pleomórficos, es decir, que pueden adoptar distintas formas. Carecen de pared celular rígida, estando su citoplasma limitado por una membrana celular que contiene esterol. Por esta razón no se tiñen con la tinción de Gram, coloreándose ligeramente con Giemsa.
Grupo de organismos eucariotas entre los que se encuentran los mohos, las levaduras y los organismos productores de setas.
Las levaduras son hongos unicelulares, muy abundantes en la naturaleza y con forma redonda u ovoide.
Es un género de hongos unicelulares también llamados levaduras. La especie de Candida más significativa por su importancia clínica es Candida albicans. Las infecciones causadas por hongos se denominan micosis. Candida albicans es un comensal de las mucosas humanas, sobre todo de la mucosa oral, digestiva y genital. Las micosis causadas por Candida albicans o por otras especies de Candida se denominan (candidiasis) en humanos y en otros animales, especialmente en pacientes con inmunosupresión
Filamentos, ramificados o no, de tamaño microscópico, que reunidos con otros filamentos forma el cuerpo vegetativo de los hongos, el micelio.