¿Qué entiendes por mantenimiento?
Podemos definir mantenimiento como el conjunto de labores encaminadas a que el cultivo celular se realice de forma óptima. Una vez que éste se ha puesto en marcha las células comenzarán a dividirse. El crecimiento de las células en el cultivo es exponencial. El número de células aumenta cada generación de acuerdo con una progresión geométrica, 2, 4, 8, 16, 32… En la imagen se observa a un técnico examinando un cultivo celular en el microscopio invertido.
Dentro del recipiente de cultivo las células continuarán dividiéndose de forma exponencial hasta que algún factor de crecimiento comience a escasear en el medio o el espacio disponible comience a disminuir. Entonces el crecimiento se detiene y el cultivo entra en una fase de meseta, en la que no se producen divisiones. A esta fase se le llama fase estacionaria o de quiescencia.
Cuando el factor limitante se recupera, el cultivo vuelve a dividirse de nuevo. De ahí que en los cultivos de larga duración, para asegurar el crecimiento exponencial de las células, sea necesario cambiar cada cierto tiempo el medio de cultivo. Esta es una de las labores incluidas en el mantenimiento.
Además del cambio de medio, que debe realizarse en estrictas condiciones de asepsia, ya explicadas en la unidad de trabajo anterior, otra de las labores propias del mantenimiento es la inspección de los cultivos.
Debes inspeccionar los cultivos diariamente. Es conveniente mantener un registro en el consten las acciones realizadas sobre cada uno de ellos.
A la hora de la inspección debes anotar:
- Su aspecto: comprueba el color del medio, recuerda que está relacionado con su pH. El medio en condiciones óptimas debe tener un color rojo. Un color amarillo del medio de cultivo, indicaría acidificación del mismo. La acidificación del cultivo suele indicar la posibilidad de contaminación.
- Su transparencia: cualquier signo de turbidez en él puede indicar presencia de contaminación.
- Al microscopio las células sanas son brillantes y en un cultivo en monocapa estarán pegadas al sustrato. Un alto porcentaje de células despegadas indicaría un problema en el cultivo.
- También se debe comprobar si el cultivo progresa. El cese de la multiplicación de un cultivo podría ser debido a una infección vírica. Es importante anotar el grado de confluencia de las células. Se define el grado de confluencia como el porcentaje de la superficie del recipiente que ocupan las células.
En las imágenes puedes observar dos momentos del mismo cultivo celular. En la imagen de la izquierda todavía se pueden observar huecos entre las células. En la imagen de la derecha estos huecos han desaparecido y las células comienzan a formar grumos. Si estas células se mantienen así el cultivo se detendrá.
| Confluencia 60 % | Confluencia 100 % |
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