3.- Procesamiento de cultivos de sangre periférica.

Caso práctico

En la imagen se observa el interior de una estufa donde hay colocados varios tubos de cultivo celular.

Susana que puso a cultivar su sangre hace tres días, espera impaciente a que llegue el momento de realizar el sacrificio celular.

Carlos, que no se atrevió en su momento a que le extrajeran sangre, también tiene cierta curiosidad por ver qué pasa con los cromosomas de Susana. Juntos tratan de hacerse una idea de lo que estará pasando en la estufa durante el período de cultivo.

La fitohemaglutinina (PHA) añadida al medio de cultivo, habrá activado a los linfocitos T induciendo su proliferación. Para conseguir que todos los linfocitos de la muestra comiencen a dividirse a la vez es necesario sincronizar el cultivo.

La sincronización se realiza añadiendo unas sustancias al cultivo durante su incubación a las 48 y 72 horas respectivamente. Con ello se consigue aumentar el número de células que entran en metafase en el cultivo al mismo tiempo.

—¿Cómo hacemos para que los linfocitos T detengan su proceso de división en metafase? —pregunta Marta.

Carlos y Susana reflexionan, pero no consiguen recordar el nombre del compuesto…

¿Cómo obtenemos células en metafase?

Una vez que el período de cultivo ha finalizado, se añade a los tubos una sustancia llamada colchicina o colcemida a una concentración final de 0,2 µg/ml y se continúa con su incubación durante una o dos horas.

La colchicina actúa rompiendo los filamentos del huso acromático, por lo que la división celular se detendrá en metafase dejando a los cromosomas en el plano ecuatorial de la célula.
En la imagen se observan dos botellas que contienen los reactivos necesarios para el cultivo de las muestras de sangre periférica y su detención en metafase.

En un ciclo celular normal después de finalizada la metafase, los filamentos del huso acromático se retraen y los cromosomas se mueven hacia los polos de la célula continuando con el período de anafase. La colchicina, rompe estos filamentos e impide que el ciclo celular progrese, por lo que durante el tiempo de incubación con esta sustancia todas las células que comiencen su división quedarán detenidas en metafase.

Es importante determinar bien el tiempo de actuación de la colchicina, porque no todo son ventajas. Cuanto más tiempo estén las células en contacto con la colchicina, mayor número de metafases habrá en el cultivo pero también el grado de condensación de los cromosomas será mayor, lo que dificultará el análisis posterior de los mismos.

El procesamiento de los cultivos es un proceso relativamente largo, se realiza durante dos días consecutivos e incluye las siguientes fases:

  1. Sacrificio de las células en metafase.
  2. Fijación de los cromosomas.
  3. Preparación de las extensiones cromosómicas.

Huso meiótico o huso mitótico, es el conjunto de microtúbulos que brotan de los centriolos durante los procesos de división celular, sea mitosis (huso mitótico) o meiosis (huso acromático o meiótico), y que van desde los centrómeros de los cromosomas hacia los centriolos en los polos.

Autoevaluación

Pregunta

¿Cuántas células por ml habrá en un cultivo al finalizar el proceso de tripsinización si el recuento realizado en el hematocitómetro muestra una media de 15 células?

Respuestas

15 • 103 células por mililitro.

15 • 104 células por mililitro.

3,7 • 104 células por mililitro.

30 • 104 células por mililitro.

Retroalimentación