Una vez realizado el estudio del número y la morfología cromosómica mediante tinción sólida, es necesario realizar la identificación de cada uno de los cromosomas. Las técnicas de bandeado o de bandeo, tienen como objetivo identificar a los cromosomas o partes de su estructura.
Existen otras técnicas de bandeao cromosómico, como la tinción de bandas R o las bandas Q que al igual que la técnica de bandeo G, dan lugar a una serie de bandas distribuidas a lo largo de toda la longitud del cromosoma. Otras técnicas de bandeo como la tinción de bandas C y las bandas NOR, se utilizan para demostrar la presencia de determinadas regiones o estructuras en el cromosoma, así por ejemplo las bandas C se utilizan para estudiar las regiones situadas al lado del centrómero y las bandas NOR ponen de manifiesto las regiones terminales de los cromosomas acrocéntricos.
Cromosoma con centrómero localizado muy cercano al extremo. Los cromosomas humanos 13,14,15,21 y 22 son acrocéntricos. Un cromosoma acrocéntrico es aquel cromosoma en el que el centrómero se encuentra más cercano a uno de los telómeros, dando como resultado un brazo muy corto (p) y el otro largo (q).
Bandeo G:
El bandeo G se realiza tratando preparaciones envejecidas mediante calor (incubándolas por ejemplo dos días en la estufa a 56 ºC), con una concentración baja de tripsina (que digiere parcialmente las proteínas que forman parte de los cromosomas) y . Todo ello genera en los cromosomas una serie de regiones claras y oscuras que reciben el nombre de patrón de bandas. Cada cromosoma posee un patrón de bandas característico que se utiliza en su identificación.
Con este método, cada cromosoma se tiñe con un patrón característico de bandas oscuras (G+) y claras (G-) que se corresponden con regiones ricas en AT y GC respectivamente.
Si los cromosomas aparecen huecos o deshilachados se deberá disminuir el tiempo; si muestran una morfología cromosómica estándar o poco bandeada se aumentará dicho tiempo. Se necesitan de cuatro a seis preparaciones para dar con el tiempo correcto de bandeo.
¿Cómo se obtienen las bandas?
En la tabla se muestran los pasos principales del procedimiento de bandeo cromosómico. Tras el tratamiento de la extensión con tripsina precalentada a 37ºC durante un tiempo variable (alrededor de 8 segundos) se neutraliza su acción sumergiendo el portaobjetos en agua destilada y se tiñe con solución de Giemsa o Leishman en metanol a pH 6,8 durante 5 minutos. Se lava, se deja secar y se observa al microscopio.
| Tratamiento con tripsina | Tinción | Lavado |
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La imagen muestra una fotografía en blanco y negro de lo que ve el técnico al microscopio con el objetivo de 100x. Cada cromosoma muestra un patrón de bandas semejante a un "código de barras" que permite su identificación. Los cromosomas que han sido detenidos en la mitad del período de metafase muestran una resolución de alrededor de 400 bandas. Se pueden hacer cariotipos con cromosomas menos condensados, detenidos en prometafase, que muestren un mayor número de bandas, se llaman cariotipos de alta resolución y contienen entre 550 y 850 bandas.
Bandeo R:
También llamado bandeo reverse o inverso. El principio básico de esta técnica es el tratamiento de las preparaciones en soluciones tamponadas a altas temperaturas seguidas de una tinción, que en nuestro caso es Giemsa. Las bandas obtenidas tras este proceso son las inversas respecto de las G.
El procedimiento consiste en usar preparaciones envejecidas a temperatura ambiente de una a tres semanas, se incuban en tampón Sorensen (pH 6,8) a 85º C, unos ocho minutos, aunque este tiempo deberá ajustarse en cada caso, lavar en tampón Sorensen a temperatura ambiente, teñir con Giemsa de seis a diez minutos, lavar en agua destilada y secar al aire.
Bandeo C:
La técnica del bandeo C produce una tinción selectiva de la heterocromatina constitutiva. Las bandas que aparecen se localizan preferentemente en el centrómero y en ocasiones en otros puntos. La técnica consiste en un tratamiento con una base fuerte y una incubación posterior en una solución salina.
Para la obtención de las bandas, las preparaciones se tratan secuencialmente con ácido clorhídrico, se lavan en agua destilada y secar al aire, se tratan posteriormente con un álcali (hidróxido de bario) y calor (en tampón 2x SSC a 60-65ºC). Finalmente se tiñen con Giemsa.
Bandeo NOR:
Esta técnica localiza aquellas regiones del cromosoma que organizan y mantienen el nucleolo en la interfase. La técnica consiste en poner de cuatro a seis gotas de AgNO3 (nitrato de plata), al 5% sobre las preparaciones y taparlas con un cubre, incubar a 37º C en cámara húmeda de 18 a 24 horas, retirar el cubre, lavar en agua destilada y secar al aire.
Bandeo Q:
Requiere un microscopio de fluorescencia para su observación. Es una técnica de bandeo fluorescente que utiliza quinacrina para teñir los cromosomas. Las bandas Q brillantes coinciden con las bandas G oscuras (G+).
Cromosoma con centrómero localizado muy cercano al extremo. Los cromosomas humanos 13,14,15,21 y 22 son acrocéntricos. Un cromosoma acrocéntrico es aquel cromosoma en el que el centrómero se encuentra más cercano a uno de los telómeros, dando como resultado un brazo muy corto (p) y el otro largo (q).