4.- Técnicas de tinción y bandeado cromosómico.

Caso práctico

Carlos y Susana trabajando con el espectrofotómetro.

Una vez realizadas las extensiones cromosómicas Carlos y Susana preparan los materiales para su tinción.

La tinción es un paso importante, el estudio de los cromosomas se hace sobre las imágenes obtenidas de estos al microscopio.

Si la calidad de la tinción no es buena todo el análisis se resiente.

Como verás más adelante los cromosomas deben ser fotografiados con cámaras digitales acopladas a los microscopios.

La imagen muestra el interior de una estufa donde se ha colocado una bandeja con extensiones para ser incubadas .Junto a las extensiones hay una pegatina que indica el día en que se inició la incubación.

De los portaobjetos extendidos para cada caso:

  • Uno se tiñe con tinción sólida.
  • Los demás se guardan en la estufa para poder ser utilizados en las técnicas de bandeado. Estas técnicas exigen un "envejecimiento" previo de los cromosomas que se puede realizar dejándolos de 7 a 10 días a Tª ambiente, 4 o 5 días a 37ºC  o uno o dos días a 56 ºC en la estufa. El envejecimiento consiste en someter a la muestra a una determinada Tª, por un tiempo determinado, para facilitar la eliminación de los restos de fijador así como que han perdido la humedad residual, que podrían dificultar la técnica posterior de bandeo. Cuanto mayor sea la Tª de envejecimiento , menor será el tiempo empleado para esta acción.

Existen varios métodos para teñir cromosomas utilizados en el estudio de las preparaciones cromosómicas. Los más empleados en rutina son el método de tinción convencional o tinción sólida que da lugar a unos cromosomas de apariencia uniforme y los métodos que dan como resultado la formación de bandas o áreas claras y oscuras en los cromosomas que se conocen con el nombre de métodos de bandeado.

En la tinción cromosómica se emplean colorantes de tipo Giemsa. Son colorantes que llevan una serie de compuestos que en solución están cargados positivamente por lo que se unirán al ADN que tiene una carga negativa neta. El tampón utilizado en estas técnicas de tinción es un tampón fosfato de pH 6,8.

También se puede utilizar Leishman, una mezcla de eosina y azul de metileno disueltos en metanol.

Colorante ácido de color rosado que se utiliza en histología (generalmente, junto con colorantes básicos como la hematoxilina) para teñir cortes histológicos de tejidos.

También llamado cloruro de metiltionina, es un colorante orgánico, de gran utilidad en el campo de la medicina, especialmente para teñir preparaciones microscópicas. Este uso aún se conserva, pues actualmente es utilizado en técnicas de coloración simple para el diagnóstico de ciertas patologías infecciosas, tales como, pitiriasis versicolor, eritrasma o meningitis por Haemophilus influenzae. También es frecuente su uso como colorante de contraste, como por ejemplo en la técnica de coloración de Ziehl Neelsen

Autoevaluación

Pregunta

Señala cuáles de estas afirmaciones con respecto al procedimiento de sacrificio celular son correctas.

Respuestas

El sacrificio celular comienza añadiendo a las células del cultivo una solución fijadora de las metafases.

En el choque osmótico se emplea una solución hipotónica de cloruro de potasio para romper la membrana de los eritrocitos.

El ácido acético favorece la lisis de los eritrocitos dejando intacta la membrana de los leucocitos.

El fijador utilizado en los últimos pasos del proceso de fijación es metanol: acético en proporción 1:3.

La centrifugación de los tubos durante el sacrificio celular se realiza a 13.000 rpm.

Retroalimentación